Proyectos

· Utilización de células madre adultas sinoviales para la reparación de cartílago articular humano. FIS: 05/2495.

OBJETIVOS: Evaluar la capacidad adipogénica y osteogénica de una población celular procedente de tejido sinovial, con demostrada capacidad condrogénica.

Evaluar, en un modelo in vitro, la reparación del cartílago articular humano con esta población, células madre adultas humanas procedentes de tejido sinovial (CMAhS).

METODOLOGIA: Aislamiento, cultivo celular y expansión de las CMAhS a partir de un fragmento de tejido sinovial humano.

Osteogénesis y adipogénesis: Valoración de la capacidad para diferenciarse a osteocitos y adipocitos en cultivo. Se utilizarán técnicas histoquímica para identificar la presencia de depósitos de calcio y vacuolas lipídicas.

Modelo in vitro en cartílago normal y artrósico: Creación de defectos en los dos tipos de cartílago articular humano y siembra de CMAhS. Valoración macrosocópica de la reposición del tejido neo-sintetizado utilizando la escala de Mankin. Valoración microscópica de la reposición del tejido neo-sintetizado por estudios histológicos e inmunohistoquímica.

Modelo in vivo en cartílago: Creación de defectos en cartílago articular de las rodillas de cerdo y siembra de CMAS. Valoración macrosocópica de la reposición del tejido neo-sintetizado utilizando la escala de Mankin. Valoración microscópica de la reposición del tejido neo-sintetizado por estudios histológicos e inmunohistoquímica.

· Estudio de las Células Madre Mesenquimales (CMM) porcinas. Análisis de su potencial uso clínico en un modelo experimental de reparación del daño celular producido por el infarto de miocardio. PGIDIT04XIB91601PR.

OBJETIVO: La medula ósea contiene una pequeña población ce células conocidas como células madre mesenquimales (CMM), que tienen la capacidad de colonizar diferentes tejidos, replicarse, y diferenciarse en diversas estirpes celulares que incluyen el hueso, cartílago, adipositos, tendón, células estromales y músculo cardiaco. Para obtener un mayor conocimiento de su posible aplicación para terapia celular en humanos se necesitan realizar experimentos en animales de gran tamaño que guarden similitudes con el hombre. Nuestro objetivo es caracterizar antigénicamente y funcionalmente las CMM porcinas "in vitro", y estudiar si la implantación de CMM porcinas autólogas o heterólogas, después de su diferenciación a micardiocitos "ex vivo", puede dar lugar a un implante que produzca una mejora del funcionamiento de la función cardiaca en un modelo "in vivo" de infarto de miocardio en cerdos. SUJETOS DE ESTUDIO: Cerdos de la raza Large White de entre 25-35 kg.

METODOLOGIA: Aislamiento, cultivo celular y preparación de CMM a partir de medula ósea porcina.Obtención de anticuerpos monoclonales (AcMos) específicos de CMM porcinasCaracterización de las moléculas de superficie de las CMM mediante AcMos por técnicas de citometría de flujo e inmunohistoquímica. Ensayos de proliferación frente a linfocitos porcinos utilizando CMM porcinas autólogas o heterólogas como células estimuladoras. Diferenciación a cardiomiocitos de las CMM porcinas mediante tratamiento con 5-Azacytidina "in vitro". Evaluación de la mejora de la función cardiaca después del trasplante de miocardiocitos, generados "ex vivo" a partir de CMM autólogas o heterólogas, en un modelo de infarto de miocardio en cerdos.

· Regeneración y reparación miocárdica por células progenitoras adultas endógenas o exógenas en un modelo porcino de infarto de miocardio. FIS 06/1607.

OBJETIVO: El infarto de miocardio puede dar lugar a un fallo cardiaco que puede ser la principal causa de muerte en los países desarrollados. La terapia celular para regenerar los cardiomiocitos perdidos es una terapia nueva y prometedora para esos pacientes. Nuestro objetivo principal es analizar el papel de las células de médula osea (MO) y/o de los progenitores residentes en la regeneración y reparación miocárdica en un modelo "in vivo" de infarto de miocardio en cerdos. Para ello pretendemos: 1) estudiar si la implantación (por distintas vías de administración) de células madre mesenquimales (CMM) porcinas heterólogas, después de su diferenciación a micardiocitos "ex vivo", puede dar lugar a un implante que produzca una mejora del funcionamiento de la función cardiaca y 2) analizar la capacidad mitótica y regenerativa del tejido cardiaco después de la lesión y la posibilidad de que células madre o progenitoras adultas, residentes o movilizadas de MO, sean los responsables de la misma.

SUJETOS DE ESTUDIO: Cerdos de la raza Large White de entre 25-35 kg.METODOLOGIA:

Evaluación de la mejora de la función cardiaca después del trasplante de miocardiocitos, generados "ex vivo" a partir de CMM heterólogas, y administrados por diferentes vias en un modelo de infarto de miocardio en cerdos.

Estudio anatomopatológico en inmunohistoquímico de los corazones infartados.

Análisis de la capacidad de división de los miocitos de los corazones infartados.

Análisis de expresión de RNA mensajero de marcadores de células madre o progenitoras en los corazones infartados mediante ensayos de PCR a tiempo real.

· Estudio del Proteoma de la condrogénesis y miocardiogenesis de las celulas madre mesenquimales adultas. (Sin financiación).

OBJETIVO: Buscar marcadores proteicos que ayuden a definir el fenotipo de Célula Madre Mesenquimal y las diferenes fases en el proceso de diferenciación hacía condrocitos y miocardiocitos.

METODOLOGIA: Para realizar este proyecto se emplearan Células Madre Mesenquimales procedentes de Medula Osea y Tejido sinovial y se someteran a diferentes tipos de cultivo que inducirán la condrogénesis o la miocardiogénesis. Los extractos proteicos mitocondriales se someteran a una electroforesis 2-DE y visualizado por nitrato de plata o por la tincion con azul de Coomassie. Las bandas obtenidas seran recortadas de los geles 2D y seran analizadas usando la tecnología MALDI-TOF, MALDI-TOF/TOF y DiGE. La estudios de expresión diferencial en los geles bidimensionales se realizará utilizando el programa PDQuest.